GLA蛋白；半乳糖苷酶Α(GLA)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Galactosidase Alpha (GLa)

GALA; GL-A; Alpha-D-Galactoside Galactohydrolase; Alpha-D-Galactosidase A; Melibiase; Agalsidase

來源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標(biāo)簽：Trp81~Leu429 with N-terminal His Tag

物種來源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種。

GLA蛋白；半乳糖苷酶Α(GLA)重組蛋白性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 95%-98%（SDS-PAGE RP-HPLC）

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲存。 

長期儲存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

A、GLA蛋白；半乳糖苷酶Α(GLA)重組蛋白原核蛋白表達(dá)系統(tǒng)以大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)為代表，具有遺傳背景清楚、成本低、表達(dá)量高和表達(dá)產(chǎn)物分離純化相對簡單等優(yōu)點，缺點主要是蛋白質(zhì)翻譯后缺乏加工機制，如二硫鍵的形成、蛋白糖基化和正確折疊，得到具有生物活性的蛋白的幾率較小，查看原核蛋白表達(dá)實驗案例。

B、酵母蛋白表達(dá)系統(tǒng)以甲醇酵母為代表，具有表達(dá)量高，可誘導(dǎo)，糖基化機制接近高等真核生物，分泌蛋白易純化，易實現(xiàn)高密發(fā)酵等優(yōu)點。缺點為部分蛋白產(chǎn)物易降解，表達(dá)量不可控，查看酵母蛋白表達(dá)實驗案例。

C、桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)憑借高特異性高表達(dá)水平及翻譯后修飾功能，被用作一種表達(dá)大規(guī)模蛋白的強有力的工具系統(tǒng)，相對來說，操作流程較多，成本偏高。查看桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)案例

D、哺乳動物細(xì)胞蛋白表達(dá)服務(wù)和昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)主要優(yōu)點是蛋白翻譯后加工機制最接近體內(nèi)的天然形式，最容易保留生物活性，缺點是表達(dá)量通常較低，穩(wěn)定細(xì)胞系建立技術(shù)難度大，生產(chǎn)成本高。查看哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)案例。

表達(dá)出來的蛋白比實際大小要小，這是為什么？

GLA蛋白；半乳糖苷酶Α(GLA)重組蛋白主要原因有如下幾個方面

1. 蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于該蛋白穩(wěn)定的蛋白酶。

2. 翻譯起始位點的問題：如果一個類似于核糖體結(jié)合位點(AAGGAGG)的序列加上適當(dāng)?shù)拈g隔序列出現(xiàn)在了ATG密碼子上游，降解就會有可能出現(xiàn)。解決的方法可以采用兩端都帶有融合標(biāo)簽的載體，例如pET系列部分載體在N-端和C-端都有His-Tag融合標(biāo)簽。這樣，全長蛋白就可以通過提高咪唑濃度，在洗脫時將截短蛋白與全長蛋白區(qū)分開。或者在蛋白兩端采用不同標(biāo)簽，進(jìn)而通過親和純化的方式得到全長蛋白。

3. 影響蛋白穩(wěn)定性的另外一個因素是與N端Met相鄰的氨基酸，即N端原則，當(dāng)下列氨基酸出現(xiàn)在N端時: Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期較短，蛋白會存在不穩(wěn)定降解的問題，特別是Leu，當(dāng)它出現(xiàn)在第二個位置上時，蛋白極度不穩(wěn)定。在選擇克隆位點時， Nco I 和Nde I都是 是一個比較好的N端的克隆位點選擇，而使用NdeI的時候就要特別留意Leu的出現(xiàn)。