TLR4蛋白；TOLL樣受體4(TLR4)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Toll Like Receptor 4 (TLR4)

CD284; TOLL; HToll

來源：原核表達(dá)

宿主：E.coli

規(guī)格：10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平： 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標(biāo)簽：N-terminal His Tag

物種來源（人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種）相同的名稱，不同的物種

性狀：凍干粉

表達(dá)系統(tǒng)：  大腸桿菌

產(chǎn)品純度： 97%

保存條件：如果樣品在2-4周內(nèi)使用，可以在4°C低溫儲存。 

長期儲存，建議添加載體蛋白（0.1％HSA或BSA），并儲存在-20~ -80°C。避免多次凍融。

TLR4蛋白；TOLL樣受體4(TLR4)重組蛋白表達(dá)純化：

聯(lián)邁生物致力于為客戶提供高純度，低成本的活性重組蛋白，包括各類受體，細(xì)胞因子，生長因子，轉(zhuǎn)錄因子，激素、酶、蛋白、病毒抗原等，滿足客戶下游科研實(shí)驗(yàn)研究的需要。聯(lián)邁生物擁有先進(jìn)的蛋白表達(dá)技術(shù)及豐富的蛋白表達(dá)經(jīng)驗(yàn)，完成了多種正常條件下不表達(dá)、難表達(dá)、表達(dá)量低的蛋白的制備。

TLR4蛋白；TOLL樣受體4(TLR4)重組蛋白表達(dá)出來的蛋白比實(shí)際大小要小，這是為什么？

主要原因有如下幾個(gè)方面

1.  蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于該蛋白穩(wěn)定的蛋白酶

2.  翻譯起始位點(diǎn)的問題：如果一個(gè)類似于核糖體結(jié)合位點(diǎn)(AAGGAGG)的序列加上適當(dāng)?shù)拈g隔序列出現(xiàn)在了ATG密碼子上游，降解就會(huì)有可能出現(xiàn)。解決的方法可以采用兩端都帶有融合標(biāo)簽的載體，例如pET系列部分載體在N-端和C-端都有His-Tag融合標(biāo)簽。這樣，全長蛋白就可以通過提高咪唑濃度，在洗脫時(shí)將截短蛋白與全長蛋白區(qū)分開。或者在蛋白兩端采用不同標(biāo)簽，進(jìn)而通過親和純化的方式得到全長蛋白。

3.  影響蛋白穩(wěn)定性的另外一個(gè)因素是與N端Met相鄰的氨基酸，即N端原則，當(dāng)下列氨基酸出現(xiàn)在N端時(shí): Arg、 Lys、Phe、Leu、Trp和Tyr 蛋白的半衰期較短，蛋白會(huì)存在不穩(wěn)定降解的問題，特別是Leu，當(dāng)它出現(xiàn)在第二個(gè)位置上時(shí)，蛋白極度不穩(wěn)定。在選擇克隆位點(diǎn)時(shí)， Nco I 和Nde I都是 是一個(gè)比較好的N端的克隆位點(diǎn)選擇，而使用NdeI的時(shí)候就要特別留意Leu的出現(xiàn)。

TLR4蛋白；TOLL樣受體4(TLR4)重組蛋白如何提高蛋白的可溶性表達(dá)比例及表達(dá)量？

有些蛋白質(zhì)表達(dá)水平低，或者表達(dá)的大多是包涵體，通常情況下通過基因優(yōu)化，載體及菌株的篩選，表達(dá)條件優(yōu)化，誘導(dǎo)條件優(yōu)化等可以有效增加蛋白的可溶性比率及表達(dá)量。

1.  密碼子優(yōu)化

密碼子優(yōu)化是根據(jù)大腸對密碼子的偏好性進(jìn)行優(yōu)化篩選，一般選擇使用頻率大于20%的密碼子。經(jīng)過優(yōu)化的基因序列能提高mRNA二級結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，避免因?yàn)椴怀渥愕膖RNA庫導(dǎo)致翻譯延遲，成熟前翻譯終止，翻譯移碼和氨基酸錯(cuò)配。

2.  降低蛋白表達(dá)速率

通過降低IPTG的誘導(dǎo)濃度，降低蛋白的表達(dá)速率。通過調(diào)節(jié)促使肽鏈聚集的速率與其折疊速率平衡，有利于提高蛋白的可溶性表達(dá)。

3.  溫度

37度的表達(dá)條件往往會(huì)使一些蛋白形成包涵體，而30度的表達(dá)條件則可能產(chǎn)生可溶的或者有活性的蛋白。在某些條件下（12-20度）延長誘導(dǎo)時(shí)間（過夜）會(huì)使溶解性蛋白的產(chǎn)量達(dá)到大。

4.  細(xì)胞周質(zhì)表達(dá)

我們可以選用一些將蛋白運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞周質(zhì)的載體。周質(zhì)空間更有利于蛋白的正確折疊及二硫鍵的形成。常規(guī)選用的載體有pet22系列。但是我們要注意的是，有些蛋白并不適合于被運(yùn)輸?shù)街苜|(zhì)空間，比如一些與β-gal融合的周質(zhì)的內(nèi)部被證明是有毒的。

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