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PDGFAA酶;紅細(xì)胞引申介素DP(PDGFAA)改組酶

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-27  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):49
核心提示:PDGFAA蛋白;血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)重組蛋白英文名稱:Recombinant Platelet Derived Growth Factor AA (PDGFAA)PDGF-AA來源:原核表達(dá)宿主:E.coli規(guī)格:10μ

PDGFAA蛋白;血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)重組蛋白

英文名稱:Recombinant Platelet Derived Growth Factor AA (PDGFAA)

PDGF-AA

來源:原核表達(dá)

宿主:E.coli

規(guī)格:10μg  50μg  200μg  1mg  5mg

內(nèi)毒素水平: 1.0EU/μg(LAL法測定)具體詳見說明書

片段與標(biāo)簽:Ser87~Thr211 (Accession # P04085) with N-terminal His Tag

物種來源(人、小鼠、大鼠、豚鼠、兔、獼猴、山羊、綿羊、馬、牛、豬、雞、狗等其他物種多物種)相同的名稱,不同的物種。

性狀:凍干粉

表達(dá)系統(tǒng):  大腸桿菌

產(chǎn)品純度: 95%-98%(SDS-PAGE RP-HPLC)

保存條件:如果樣品在2-4周內(nèi)使用,可以在4°C低溫儲存。

PDGFAA蛋白;血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)重組蛋白有幾個疑點(diǎn):

1、表達(dá)量如何?

2、超聲過程中注意冰水浴了嗎?

3、“蛋白條帶由1條變成3條”是不是說表達(dá)后的全菌電泳目標(biāo)蛋白是一條帶,而在超聲或溶菌酶處理后這1條帶降解成了3條?

4、降解成的3條帶中還有原來的融合蛋白條帶嗎,量如何?

5、變性純化后的純度如何?

6、能否把相關(guān)電泳圖發(fā)上來看看?

答:蛋白表達(dá)量不高,但也不低;

超聲過程一直是在冰上進(jìn)行的;

全菌電泳目的蛋白是一條帶;

降解成3條帶后,大部分情況下是有目的融合蛋白的,量比較少;

變性純化后純度還是挺不錯的。

PDGFAA蛋白;血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)重組蛋白兩個建議:

1、用非變性純化樣品去做EK酶切、純化。

如果融合蛋白的降解是從N端開始的,而C端沒有降解,那么應(yīng)該能夠拿到38肽。

我曾經(jīng)有個這么個類似情況,酶切后證實(shí)是N端降解,C端的目的蛋白好好的,大小都對。

做EK酶切多了,往往會發(fā)現(xiàn),PET32a的融合段硫氧還蛋白加histag部分確實(shí)易被進(jìn)一步酶切水解。但Ni柱的結(jié)合特性不變,說明水解是從N端開始的。

先做酶切梯度,電泳確定酶量標(biāo)準(zhǔn)。不要用酶說明書的量,有時候差距非常大。和蛋白種類相關(guān)。

酶切后的純化方法選Ni柱穿透純化,可能要加少許咪唑及鹽,以利用酶切后的目標(biāo)蛋白不吸附Ni柱。

2、用變性純化的樣品做復(fù)性處理

PDGFAA蛋白;血小板衍生生長因子AA(PDGFAA)重組蛋白變性純化的樣品純度不錯,查閱一下有關(guān)的復(fù)性方法資料,設(shè)計一個方案。

你用超濾和透析的方法都失敗了,可以考慮用稀釋的方法,控制終蛋白濃度小于0.1mg/ml,蠕動泵滴入攪拌的稀釋液中,pH控制高的,如pH9-10,適當(dāng)加一些甘油和EDTA,DTT。

影響蛋白原核表達(dá)的因素很多,如蛋白的親水性、密碼子的稀有性、蛋白毒性等。如疏水性過強(qiáng),就難以表達(dá);稀有密碼子過多或多個稀有密碼子連在一起也難以表達(dá)。我以前也遇到過這種情況,首先要分析你的蛋白序列和二級結(jié)構(gòu),看看是否存在這些影響因素。如果必須要表達(dá)全長蛋白,像你這種情況難度就比較大,可以進(jìn)行密碼子的改造,或者更換載體,或者更換宿主菌??茨阍囼?yàn)的目的,如果不需要表達(dá)全長蛋白,如表達(dá)部分抗原性強(qiáng)的片段,可以簡單一點(diǎn),表達(dá)部分片段即可。

 


 
關(guān)鍵詞: 蛋白 表達(dá) PDGFAA 純化 AA
 
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