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情況下毒素脾蛋白;NRK

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-27  來(lái)源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):39
核心提示:公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過(guò)逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等國(guó)際品牌.產(chǎn)品名稱生長(zhǎng)特性貨號(hào)正常

公司產(chǎn)品采用干冰運(yùn)輸,經(jīng)過(guò)逐步的降溫,冷藏在-196℃度的液氮罐中,暫時(shí)停止其生命活動(dòng),保存其活性,使您的實(shí)驗(yàn)更生動(dòng),公司代理品牌有:ATCC、sciencell、ICLC、GIBCO、IST-Banca等國(guó)際品牌.

產(chǎn)品名稱

生長(zhǎng)特性

貨號(hào)

正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E說(shuō)明書

貼壁生長(zhǎng)

CS-X8161

細(xì)胞名稱 正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E

形態(tài)特性  上皮細(xì)胞

生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)

特征特性  

培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  優(yōu)質(zhì)胎牛血清,5

傳代方法  消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。

傳代情況 P(16+5)

凍存條件  完全培養(yǎng)基+8DMSO

細(xì)胞培養(yǎng)步驟:

一.正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E說(shuō)明書培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備DMEM-H培養(yǎng)基(GIBCO,貨號(hào)1199500bt,添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇懸浮培養(yǎng)基,使293T細(xì)胞懸浮生長(zhǎng)。

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。

二. 細(xì)胞處理:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品:

ANKRD42 英文名稱: 錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體 0.2ml

Anti-TRPV1/VR1 辣椒素受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml

Human growth-associated protein 43,GAP-43 ELISA Kit 人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43Multi-class antibodies規(guī)格: 48T

Anti-Socs 3 細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 規(guī)格 0.1ml

sTfR(Human soluble transferrin receptor) ELISA Kit 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體 96T

NIR2 英文名稱: 膜磷脂轉(zhuǎn)移蛋白1抗體 0.2ml
正常大鼠腎細(xì)胞;NRK-52E說(shuō)明書Rhesus antibody Rh phospho-SNAI2(Ser155+Ser158+Ser160+Tyr164+Tyr169) 磷酸化鋅指轉(zhuǎn)錄因子Slug抗體 規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM 羊抗人IgM (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg

Anti-phospho-CaMK2a (pThr286)/FITC 熒光素標(biāo)記抗磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rabbit Anti-Guinea IgG/Gold 金標(biāo)記兔抗豚鼠IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體4抗體 Anti-FGFR4 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/PE-CY5 PE-CY5標(biāo)記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

phospho-Fos B (Ser27) 英文名稱: 磷酸化癌基因FOS蛋白B抗體 0.1ml
操作要點(diǎn):

1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動(dòng)凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍,使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。

5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

 


 
 
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