概念和原理
TUNEL細胞凋亡檢測(TUNEL cell apoptosis assay)是一種靈敏度高、快速、簡便的細胞凋亡檢測方法。對于待檢測的細胞或組織樣品,經(jīng)過生物素標記和后續(xù)的DAB顯色等步驟,即可在普通光學顯微鏡下觀察到凋亡細胞。
TUN EL( terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling)即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導的dUTP缺口末端標記測定法,也稱DNA斷裂的原位末端標記法。
細胞在發(fā)生凋亡時,生物素( biotin)標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下,可以連接到凋亡細胞中斷裂的基因組DNA的3-OH末端,而生物素叉可與連接了辣根過氧化酶的鏈霉親和素( streptavidin-HRP)特異結(jié)合,在辣根過氧化酶底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)的存在下,會產(chǎn)生很強的顏色反應(深棕色),特異準確地定位正在凋亡的細胞,因而在普通顯微鏡下即可觀察和計數(shù)凋亡細胞。由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA的斷裂,因而沒有3 -OH形成,故正常細胞很少被染色。
科研和臨床應用
檢測人婁和動物肝臟、腦部、睪丸等組織的細胞凋亡;
了解細胞凋亡的機制,探索疾病發(fā)生機制與治療途徑。
標本采集、保存、運輸
懸浮生長的培養(yǎng)細胞的甩片、涂片、冰凍切片、常規(guī)石蠟切片:3-5張,樣本;
貼壁生長的培養(yǎng)細胞:無菌培養(yǎng)瓶密封常溫運輸,2-3天內(nèi)到達;
組織塊:以10%的福爾馬林或4%的多聚甲醛固定。
客戶須知
數(shù)碼照片,實驗報告。
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