在培養(yǎng)細胞的時候為什么要用胰蛋白酶？胰蛋白酶起到什

1.吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。
2.加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過細胞即可，室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當(dāng)延長消化時間。
3.顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。
4.如果發(fā)現(xiàn)消化不足，可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
5.如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘，沉淀細胞，盡量去除胰酶細胞消化液后，加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞，即可用于后續(xù)實驗。
胰蛋白酶為蛋白酶的一種，是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸達標(biāo)水解酶。它不僅起到消化酶的作用，還能限制分解糜蛋白酶原、磷脂酶等其它酶的前體，起活化作用。在細胞培養(yǎng)中，胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的反應(yīng)是不一樣的，分散細胞的活性還要與其的濃度、溫度和時間有關(guān)。在pH值8.0、溫度為37℃的條件下是胰酶分散細胞的作用能力zui強。
 

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