在培養(yǎng)細胞的時候為什么要用胰蛋白酶?胰蛋白酶起到什
1.吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
2.加入少量胰蛋白酶消化液,蓋過細胞即可,室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同,對于貼壁牢固的細胞可適當(dāng)延長消化時間。
3.顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化;或者用槍吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除消化液。加入含血清的細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
4.如果發(fā)現(xiàn)消化不足,可加入胰蛋白酶消化液重新消化。
5.如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。
胰蛋白酶為蛋白酶的一種,是從牛、羊、豬的胰臟中所提取的一種絲氨酸達標(biāo)水解酶。它不僅起到消化酶的作用,還能限制分解糜蛋白酶原、磷脂酶等其它酶的前體,起活化作用。在細胞培養(yǎng)中,胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的反應(yīng)是不一樣的,分散細胞的活性還要與其的濃度、溫度和時間有關(guān)。在pH值8.0、溫度為37℃的條件下是胰酶分散細胞的作用能力zui強。
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