細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。
EoL-1細(xì)胞,人類嗜酸性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞株
細(xì)胞代號(hào):EoL-1
細(xì)胞名稱:
EoL-1細(xì)胞,人類嗜酸性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞株
組織來(lái)源: 血液、淋巴組織haematopoietic_and_lymphoid_tissue
對(duì)應(yīng)疾?。杭毙运栊园籽?p> acute_myeloid_leukaemia
生長(zhǎng)特性:
細(xì)胞來(lái)源:
從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)
培養(yǎng)條件:
培養(yǎng)基: DMEM +10%FBS
氣相:空氣95%,二氧化碳5%
溫度:37℃
培養(yǎng):
一、貼壁細(xì)胞
1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行2-3小時(shí)的緩沖,.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代;
2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底面積80%-90%,需要對(duì)其進(jìn)行傳代,*次傳代比例為1:2。
3傳代步驟:將0.25%含EDTA胰酶置于37 預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入1mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1ml預(yù)熱好的胰酶,置于37 孵育消化(*次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為消化時(shí)間,記錄消化時(shí)間,以便于下次消化),消化好后加入1ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之完全脫落,然后收集細(xì)胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,進(jìn)行傳代。
二、懸浮細(xì)胞
1.用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒,然后置于無(wú)菌操作臺(tái),打開瓶口,輕輕吹打后,將其中的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中,然后1200rpm離心3min,去上清;
2.將離心好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T-25瓶中,并加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基,然后將其置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液(離心后去舊液,加入新鮮培養(yǎng)基);
3.顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)目比較多時(shí),對(duì)其進(jìn)行傳代,*次傳代比例為1:2(離心后平均分成兩瓶培養(yǎng))。
細(xì)胞總數(shù):
1~3*106
傳代周期:
2-3天
傳代比例:
1:2~1:4
換液頻率:
2-3天
凍存液:
90%FBS+10%DMSO
注意事項(xiàng):
1 收到細(xì)胞后首先觀察T-25瓶是否有損壞、漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2 瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用,請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)
3 對(duì)于貼壁細(xì)胞,若大部分細(xì)胞漂浮,置于培養(yǎng)箱隔夜觀察,大部分漂浮細(xì)胞重新貼壁,表明細(xì)胞活力正常,繼續(xù)培養(yǎng),剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉;若大部分細(xì)胞仍然不貼壁,將漂浮的細(xì)胞離心收集,用臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定細(xì)胞活力,并與本公司銷售人員及時(shí)聯(lián)系。
4 建議客戶收到細(xì)胞后不同倍鏡各拍幾張細(xì)胞的照片,記錄細(xì)胞狀態(tài),如細(xì)胞狀態(tài)出現(xiàn)問(wèn)題請(qǐng)于一周內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系,以便于更好的幫您解決問(wèn)題,超過(guò)時(shí)間我段,本公司則默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)良好,不免費(fèi)對(duì)后續(xù)細(xì)胞狀態(tài)問(wèn)題進(jìn)行售后。
5 因細(xì)胞產(chǎn)品的特殊性,如客戶對(duì)本公司細(xì)胞質(zhì)量存有疑問(wèn),請(qǐng)于收到細(xì)胞后1月內(nèi)與本公司銷售聯(lián)系,超過(guò)時(shí)間段,本公司則默認(rèn)細(xì)胞質(zhì)量?jī)?yōu)良,不承擔(dān)因細(xì)胞產(chǎn)生的任何責(zé)任。
Noverse細(xì)胞庫(kù)建立有標(biāo)準(zhǔn)化GMP細(xì)胞培養(yǎng)車間,保藏細(xì)胞種類2000余,從來(lái)源、引進(jìn)、培養(yǎng)、凍存、復(fù)蘇、運(yùn)輸,注重每一個(gè)環(huán)節(jié),提供活力強(qiáng),代數(shù)靠前,優(yōu)質(zhì)細(xì)胞株細(xì)胞系。
優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞系,專業(yè)的技術(shù)保證,完善的售后服務(wù),您的需求,我們的目標(biāo)!liver
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