促腎上腺皮質(zhì)激素

放免疫分析藥盒說(shuō)明書(shū)

Adrenocorticotropic Hormone Radioimmunoassay Kit

一、概述及臨床意義

ACTH是由垂體前葉細(xì)胞分泌的39個(gè)氨基酸組成的直鏈多肽，分子量4500，在循環(huán)中的半衰期僅為10~25min。ACTH的作用為促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)增生、合成和分泌皮質(zhì)類(lèi)固醇，同時(shí)也促時(shí)腎上腺素、生長(zhǎng)激素合成。ACTH的合成和分泌受下丘腦促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)、腎上腺皮質(zhì)激素以及加壓素的調(diào)節(jié)。我們利用ACTH的18~39片段的特異抗體，建立了特異、靈敏的測(cè)定血漿、體液中ACTH18-39片段的放射免疫分析方法。該抗體也能同組織、細(xì)胞切片中特異的ACTH和體外純化的ACTH特異結(jié)合，用于臨床組織化學(xué)診斷ACTH水平變化。因此該方法適用于腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)、異位ACTH綜合征、腎上腺腺瘤上腺皮質(zhì)功能減退等諸多臨床疾病時(shí)血漿ACTH水平的監(jiān)測(cè)。

二、測(cè)定原理

應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)機(jī)制原理，標(biāo)準(zhǔn)或樣品中的ACTH和加入的125I- ACTH 共同與一定量的特異性抗體產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)性免疫反應(yīng)。125I -ACTH與抗體的結(jié)合量與標(biāo)準(zhǔn)或樣品中ACTH的含量呈一定的函數(shù)關(guān)系。用免疫分離試劑（P.R.）

將結(jié)合部分（B）與游離部分（F）分離后，測(cè)定結(jié)合部分的放射性強(qiáng)度，

并計(jì)算相應(yīng)結(jié)合率B/B0。用已知標(biāo)準(zhǔn)ACTH含量與對(duì)應(yīng)結(jié)合率作圖，即得

標(biāo)準(zhǔn)抑制曲線(xiàn)。從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上查出對(duì)應(yīng)結(jié)合率的待測(cè)樣品中的含量。

三、試劑盒組成

 規(guī)格 組份 

100管

50管

制品狀態(tài)

1）ACTH標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）

6瓶

6瓶

固 體

2）125I- ACTH（紅色）

1瓶

1瓶

固 體

3）兔抗-ACTH抗血清（蘭色）

1瓶

1瓶

固 體

4）驢抗兔免疫分離劑

1瓶/55ml

1瓶/28ml

液 體

5）ACTH緩沖液（無(wú)色）

1瓶/25ml

1瓶/25ml

液 體

6）EDTANa2 10%

1瓶/3ml

1瓶/3ml

液  體

四、試劑的配制、使用方法和保存標(biāo)準(zhǔn)ACTH 溶液：使用前用緩沖液1ml溶解，混勻。2~8℃避光保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定，濃度分別為0、5、15、45、135、405pg/ml。125I- ACTH溶液：使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml

溶解)，混勻。如一次加樣超過(guò)100管，兩瓶混合后使用；2~8℃避光保存標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。兔抗-ACTH 抗血清：使用前用緩沖液(100管10.5ml溶解，50管5.5ml

溶解)，混勻。如一次加樣超過(guò)100管，兩瓶混合后使用；2~8℃避光保存標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。驢抗兔免疫分離試劑：1瓶，液體，2~8℃保存，在標(biāo)識(shí)的有效期內(nèi)穩(wěn)定。加樣前必須搖勻！樣本處理

取靜脈血2ml，注入含10%EDTA二鈉30ul的試管中，混勻4℃,3000rpm離心10 min,分離血漿，待測(cè)；如不立即測(cè)量，可將樣本密封后，置于2~8℃或-20℃儲(chǔ)存?zhèn)錅y(cè)，2~8℃保存不應(yīng)超過(guò)48小時(shí)，-20℃保存不超過(guò)2個(gè)月。冰凍樣品測(cè)定前，使樣本置于室溫或冷水中復(fù)融，再次4℃,3000rpm離心5 min,取上清測(cè)定。測(cè)定步驟

取圓底聚苯乙烯試管若干，用記號(hào)筆或特殊鉛筆編號(hào)NSB，S0 S6和待測(cè)樣品管等，然后用微量取樣器按下表加樣。

操作程序表  （單位： l）

 管別

試劑

NSB

S0

S1 S5

待測(cè)

樣品管

緩沖液

200

-

ACTH 標(biāo)準(zhǔn)品

100

100

待測(cè)樣品或質(zhì)控

100

125I- ACTH 

100

100

100

100

兔抗-ACTH 抗血清

100

100

100

混勻，任取三管測(cè)總T，4℃溫育18小時(shí)以上

驢抗兔免疫分離試劑

500

500

500

500

充分搖勻后，室溫放置15分鐘，3500轉(zhuǎn)/分鐘離心15分鐘，吸棄上清，測(cè)各沉淀管的放射性計(jì)數(shù)(cpm)。數(shù)據(jù)處理聯(lián)機(jī)處理:由電腦自動(dòng)處理得出結(jié)果。注意放射免疫方法和免疫放射方法由于原理不同，處理軟件也不一樣，用戶(hù)一定要使用適合的處理

軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。在此建議用戶(hù)使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式。手工作圖或計(jì)算器處理:

1).百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)S0管計(jì)數(shù)為B0，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B，非特異管計(jì)數(shù)為NSB，則百分結(jié)合率計(jì)算公式如下：B/ B0=(B－NSB)/( B0－NSB) 100%

2).logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式如下:

 logit=ln(B/ B0)/(1－B/ B0)

3)手工作圖：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（理想化時(shí)是一條直線(xiàn)）。根據(jù)待測(cè)樣品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值。注意：如果使用普通坐標(biāo)紙，查出的數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是zui后的濃度值。

4).計(jì)算器處理；使用有線(xiàn)性擬合功能的計(jì)算器，可以比較方便地計(jì)算出樣品濃度值，具體操作方法請(qǐng)查閱計(jì)算器的使用說(shuō)明書(shū)。如果用戶(hù)需要可以和北方所，我們可以向您提供使用方法。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)舉例（僅供參考，不得用于實(shí)際計(jì)算）。

項(xiàng)目

B/T

B/B0（濃度單位pg/ml）

NSB

零標(biāo)準(zhǔn)

5

15

45

135

405

%

2.5

45

91

74

56

32

14

 本測(cè)定盒主要技術(shù)指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)范圍：5 405pg/ml靈敏度： 5pg/ml批內(nèi)變異系數(shù)（CV）： 10%;

 批間變異系數(shù)（CV）： 15%使用期限：見(jiàn)產(chǎn)品外包裝。參考正常值：測(cè)定本所工作人員20例(21-45歲)早8：00血漿中ACTH濃度為7.9-32.1pg/ml均值17.3 5.73pg/ml;下午16：00血漿中ACTH濃度為10.7-30.5pg/ml，均值18.4 5.6pg/ml。測(cè)定門(mén)診查體人群202例(14-76歲)，早晨空腹血清中ACTH

濃度為5.08-32.86pg/ml,均值14.56 6.22pg/ml。

由于地區(qū)及使用儀器不同,所測(cè)的正常值會(huì)存在一定的差異,所以本說(shuō)明書(shū)提供的正常值僅作參考.各實(shí)驗(yàn)室能建立符合本實(shí)驗(yàn)室要求的正常值范圍。注意事項(xiàng)收到試劑盒后，盡快存放在2~8℃；凍干品溶解后，應(yīng)保存在2~8℃條件下，不要反復(fù)凍融。125I- ACTH一次使用不完時(shí)，可先用少量緩沖液溶解，分成若干支，-20℃保存，一次使用一支。實(shí)驗(yàn)前全部試劑應(yīng)放置室溫下平衡。本產(chǎn)品組份分為兩類(lèi)，即液體組份、 凍干組份。液體組份標(biāo)簽上的有效期是指未開(kāi)蓋、開(kāi)封時(shí)當(dāng)儲(chǔ)存條件符合標(biāo)簽要求時(shí)的有效期限，但開(kāi)蓋開(kāi)封后的有效期zui多為45天（具體期限見(jiàn)本產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)有關(guān)說(shuō)明）； 凍干組份標(biāo)簽上的儲(chǔ)存條件是指復(fù)溶后應(yīng)采用的儲(chǔ)存條件，而有效期是指未復(fù)溶條件下當(dāng)儲(chǔ)存條件符合標(biāo)簽時(shí)的有效期限，復(fù)溶后的有效期限在標(biāo)簽規(guī)定的儲(chǔ)存條件下zui多為45天（具體期限見(jiàn)本產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)有關(guān)說(shuō)明）。參考文獻(xiàn)李振甲 激素的放射免疫分析 科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社 1985。Atsushi Tagaki etal核醫(yī)學(xué)（日）15：275，1978Brrr WA et al:Lancet 2:12277,1975Chopraij:Clin Invest 54:583,1974Kenneth Detal:Jclin Endccrinol Metab 44:660,1977

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