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毒素NAD半胱氨酸(GSH)試劑盒寫明vs91化學工業(yè)儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-26  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):76
核心提示:大鼠還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒說明書本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中還原型谷胱甘肽(GSH)的含量。谷胱甘肽實驗原理: 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠還原型谷胱甘肽(

大鼠還原型谷胱甘肽(GSH)試劑盒說明書

本試劑僅供研究使用 目的:本試劑盒用于測定大鼠血清,血漿及相關液體樣本中還原型谷胱甘肽(GSH)的含量。

谷胱甘肽實驗原理:

 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠還原型谷胱甘肽(GSH)水平。用純化的大鼠還原型谷胱甘肽(GSH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入還原型谷胱甘肽(GSH),再與HRP標記的還原型谷胱甘肽(GSH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的還原型谷胱甘肽(GSH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠還原型谷胱甘肽(GSH)含量。

 

谷胱甘肽試劑盒組成:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片(48)

2片(96)

 

密封袋

1個

1個

 

酶標包被板

1 48

1 96

2-8℃保存

標準品:720ng/L

0.5ml 1瓶

0.5ml 1瓶

2-8℃保存

標準品稀釋液

1.5ml 1瓶

1.5ml 1瓶

2-8℃保存

酶標試劑

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml 1瓶

6 ml 1瓶

2-8℃保存

終止液

3ml 1瓶

6ml 1瓶

2-8℃保存

濃縮洗滌液

(20ml 20倍) 1瓶

(20ml 30倍) 1瓶

2-8℃保存

 

樣本處理及要求:

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。

2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。

5. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟:標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在、第二孔中分別加標準品100 l,然后在、第二孔中加標準品稀釋液50 l,混勻;然后從孔、第二孔中各取100 l分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50 l,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50 l棄掉,再各取50 l分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50 l分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50 l,混勻后從第七、第八孔中分別取50 l加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50 l,混勻后從第九第十孔中各取50 l棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50 l,濃度分別為480 ng/L,320 ng/L,160 ng/L,80 ng/L,40 ng/L)。加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 l,然后再加待測樣品10 l(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。加酶:每孔加入酶標試劑50 l,空白孔除外。溫育:操作同3。洗滌:操作同5。顯色:每孔先加入顯色劑A50 l,再加入顯色劑B50 l,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50 l,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

注意事項:試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間盡量控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。請每次測定的同時做標準曲線,建議做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請后乘以總稀釋倍數(shù)( n 5)。封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

 

計算:

以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標, 

在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD 

值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋  

倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標 

準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值 

代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋  

倍數(shù),即為樣品的實際濃度。                 (此圖僅供參考)

試劑盒性能:

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應分別小于9%和11%

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存:;2-8℃。

2.有效期:6個月

 

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關鍵詞: nbsp 保存 稀釋 樣品 標準
 
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