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150023安QIAGEN REPLI安k Baby Chow 以外DNA縮減催化劑vs基因/蛋白質(zhì)提煉安紅榮微便(北京)生命體技術(shù)裝備控股

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-26  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):92
核心提示:QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因組擴(kuò)增試劑使用創(chuàng)新的多位移擴(kuò)增(MDA)技術(shù),從小樣品中提供優(yōu)化的全基因組擴(kuò)增試劑(WGA)。50μl反應(yīng)的典型DNA產(chǎn)量高達(dá)10μg,平均產(chǎn)物長度大于10kb(范圍在2kb和10
QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因組擴(kuò)增試劑
使用創(chuàng)新的多位移擴(kuò)增(MDA)技術(shù),從小樣品中提供優(yōu)化的全基因組擴(kuò)增試劑(WGA)。50μl反應(yīng)的典型DNA產(chǎn)量高達(dá)10μg,平均產(chǎn)物長度大于10kb(范圍在2kb和100kb之間)。獨(dú)特的REPLI-g技術(shù)可從各種小型或珍貴樣品中提供高度均一的WGA,包括純化的基因組DNA,或直接來自新鮮或干燥的血液,新鮮或冷凍組織和細(xì)胞。

 紅榮微再(上海)生物工程技術(shù)有限公司 :1500 1904 520   Q:239 555 7778

QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因組擴(kuò)增試劑

用于從小或珍貴樣品中進(jìn)行高度均一的全基因組擴(kuò)增易于擴(kuò)增,產(chǎn)量高達(dá)10 g基因組基因座的無偏差擴(kuò)增多位移放大(MDA)帶來可靠的結(jié)果擴(kuò)增的DNA非常適合大多數(shù)下游應(yīng)用長期儲(chǔ)存期間沒有DNA降解的風(fēng)險(xiǎn)

       REPLI-g Mini Kit使用創(chuàng)新的多位移擴(kuò)增(MDA)技術(shù),從小樣品中提供優(yōu)化的全基因組擴(kuò)增試劑(WGA)。50 l反應(yīng)的典型DNA產(chǎn)量高達(dá)10 g,平均產(chǎn)物長度大于10kb(范圍在2kb和100kb之間)。獨(dú)特的REPLI-g技術(shù)可從各種小型或珍貴樣品中提供高度均一的WGA,包括純化的基因組DNA,或直接來自新鮮或干燥的血液,口腔拭子,新鮮或冷凍組織和細(xì)胞。這種簡單可靠的方法能夠?qū)蚪M進(jìn)行準(zhǔn)確和無偏的擴(kuò)增,并生成DNA,無需進(jìn)一步純化或定量即可應(yīng)用于不需要標(biāo)記的下游應(yīng)用。與基于PCR的WGA技術(shù)相比,

性能

來自各種樣品的高產(chǎn)量,適用于多種應(yīng)用

      使用REPLI-g Mini Kit,可以使用各種臨床和非臨床研究樣本,包括基因組DNA,新鮮或干燥的血液,新鮮或冷凍組織和細(xì)胞。每50 l反應(yīng)的典型DNA產(chǎn)量始終達(dá)到10 g,而無論模板DNA的數(shù)量如何,通常都能獲得均一的擴(kuò)增DNA產(chǎn)量。從不同的模板濃度獲得均勻的DNA產(chǎn)量始終是重要的,但對(duì)于高通量應(yīng)用尤其重要,這需要隨后的遺傳分析,而無需額外測量或調(diào)整DNA濃度。

      REPLI-g擴(kuò)增DNA的平均產(chǎn)物長度通常大于10kb,范圍在2kb和100kb之間,使得能夠進(jìn)行下游應(yīng)用,例如復(fù)雜的限制酶分析和長程PCR。REPLI-g擴(kuò)增的DNA非常適用于基因分型應(yīng)用,例如使用TaqMan 引物/探針組進(jìn)行SNP基因分型,測序和STR /微衛(wèi)星分析。

成功用于下一代測序

      許多出版物已經(jīng)證明REPLI-g擴(kuò)增DNA成功應(yīng)用于下一代測序(NGS)應(yīng)用,包括從腫瘤細(xì)胞的外顯子組和全基因組測序,到宏基因組學(xué)研究,到單細(xì)胞分析(對(duì)于一系列近期出版物而言)在NGS中成功使用REPLI-g,請參閱我們的WGA資源頁面)。由于使用全基因組擴(kuò)增的DNA用于NGS和陣列應(yīng)用已經(jīng)引起爭議,我們檢測到可能影響使用擴(kuò)增DNA用于這些下游應(yīng)用的成功的潛在因素。我們確定輸入材料的質(zhì)量強(qiáng)烈影響下游NGS實(shí)驗(yàn)的成功。如果使用低質(zhì)量DNA(例如,降解的DNA)或老化的組織材料,所得到的擴(kuò)增的DNA可能不會(huì)給出可靠的結(jié)果(數(shù)據(jù)未顯示)。然而,使用REPLI-g技術(shù)的WGA在完整細(xì)胞或未降解的純化DNA上顯示NGS結(jié)果與用純化的gDNA獲得的結(jié)果相當(dāng)?;蚪M基因座序列的序列覆蓋和比對(duì)比較表明WGA后的垃圾DNA水平最小化,而擴(kuò)增和基因組DNA的錯(cuò)誤率在相似的百分比范圍內(nèi)。

高保真全基因組擴(kuò)增

      REPLI-g技術(shù)在整個(gè)基因組中提供高度均一的DNA擴(kuò)增。Phi29聚合酶可復(fù)制高達(dá)70kb而不與基因組DNA模板解離。與基于PCR的全基因組擴(kuò)增(WGA)技術(shù)相比,Phi29聚合酶具有3 5 核酸外切酶校正活性,并且在復(fù)制期間與Taq DNA聚合酶相比保持高達(dá)1000倍的保真度。試劑盒中提供的外切核酸酶抗性引物可確保高產(chǎn)量的DNA產(chǎn)物,WGA緩沖系統(tǒng)針對(duì)非常長的閱讀長度和無偏的基因座表現(xiàn)進(jìn)行了優(yōu)化。

REPLI-g優(yōu)于基于PCR的WGA方法

      傳統(tǒng)的基因組DNA擴(kuò)增方法包括創(chuàng)建EBV轉(zhuǎn)化細(xì)胞系的耗時(shí)過程,然后使用隨機(jī)或簡并寡核苷酸引發(fā)的PCR進(jìn)行全基因組擴(kuò)增。此外,如其他供應(yīng)商通常使用的基于PCR的方法(例如,DOP-PCR和PEP)可以產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增假象并且給出基因座的不完全覆蓋。在一些情況下,可能產(chǎn)生小于1kb長的DNA,其不能用于許多下游應(yīng)用中。通常,由于使用低保真酶Taq,產(chǎn)生的DNA具有高得多的突變率DNA聚合酶,可導(dǎo)致容易出錯(cuò)的擴(kuò)增,導(dǎo)致例如單堿基對(duì)突變,STR收縮和擴(kuò)增。與這些缺點(diǎn)相反,REPLI-g在整個(gè)基因組中提供高度均一的擴(kuò)增,在擴(kuò)增過程中具有最小的基因座偏差和最小的突變率(參見  使用REPLI-g技術(shù)的高度代表性擴(kuò)增  和  *且準(zhǔn)確的全基因組擴(kuò)增  ) )。

原理

      獨(dú)特的REPLI-g技術(shù)使用創(chuàng)新的高保真酶Phi 29聚合酶,使用多重置換擴(kuò)增(MDA)和溫和的堿性變性步驟擴(kuò)增復(fù)雜的基因組DNA,以均勻地?cái)U(kuò)增基因組位點(diǎn)。REPLI-g Mini Kit的典型產(chǎn)量高達(dá)10 g,可以根據(jù)您的需要使用REPLI-g Midi Kit輕松按比例縮小,因?yàn)閮煞N試劑盒都基于相同的方案并使用相同的反應(yīng)體積。簡單的反應(yīng)設(shè)置和約15分鐘的極低處理時(shí)間使得REPLI-g成為一種簡單可靠的方法,當(dāng)需要有限或珍貴樣品的完整和無偏的軌跡表示時(shí)。

放大原理

      REPLI-g使用等溫基因組擴(kuò)增,稱為多位移擴(kuò)增(MDA),其涉及隨機(jī)六聚體與變性DNA的結(jié)合,然后使用酶Phi29聚合酶在恒定溫度下進(jìn)行鏈置換合成。在用作模板的每個(gè)置換鏈上發(fā)生另外的引發(fā)事件,使得能夠產(chǎn)生高產(chǎn)量的擴(kuò)增DNA。Phi 29聚合酶是一種噬菌體衍生酶,是一種具有3 5 主要核酸外切酶活性(校對(duì)活性)的DNA聚合酶,與Taq相比,其保真度高達(dá)1000倍。DNA聚合酶。在獨(dú)特,優(yōu)化的REPLI-g緩沖系統(tǒng)的支持下,Phi 29聚合酶可輕松解決二級(jí)結(jié)構(gòu),如發(fā)夾環(huán),從而防止聚合酶在擴(kuò)增過程中滑脫,停止和解離。這使得能夠產(chǎn)生高達(dá)100kb的DNA片段而沒有序列偏。

DNA的堿性變性

      基因組DNA在用于酶擴(kuò)增程序之前必須變性,這通常使用苛刻的方法完成,例如在升高的溫度下孵育(加熱孵育)或增加的pH(化學(xué)堿性孵育)。REPLI-g Midi Kit使用溫和的堿性孵育,允許均勻的DNA變性,DNA碎片非常低或產(chǎn)生無堿基位點(diǎn)。這導(dǎo)致擴(kuò)增的DNA具有非常高的完整性,并使擴(kuò)增片段的長度最大化,從而均勻地表示基因組基因座和序列。使用REPLI-g Mini Kit,可確保在后續(xù)下游應(yīng)用中獲得可靠的結(jié)果,而不會(huì)出現(xiàn)假陽性或陰性數(shù)據(jù),這與其他使用熱誘導(dǎo)變性的WGA技術(shù)不同,后者會(huì)損害模板DNA,從而導(dǎo)致偏向和代表性不足的位點(diǎn)

程序

簡單,一管程序

      REPLI-g Mini Kit使用簡單可靠的方法從少量分離的靶基因組DNA或直接從全血,干血卡,血沉棕黃層和組織培養(yǎng)細(xì)胞中獲得準(zhǔn)確的基因組擴(kuò)增。加入裂解緩沖液,裂解樣品材料并使DNA變性,然后進(jìn)行短時(shí)間的孵育。中和后,加入預(yù)混合物(包括REPLI-g Mini DNA聚合酶),等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)在30℃下進(jìn)行過夜。REPLI-g擴(kuò)增的DNA可以在-20 C下長期保存,沒有負(fù)面影響。

應(yīng)用

REPLI-g擴(kuò)增基因組可用于多種下游應(yīng)用,包括:使用TaqMan 引物/探針組進(jìn)行SNP基因分型基于qPCR和PCR的突變檢測新一代測序STR /微衛(wèi)星分析桑格測序RFLP和Southern印跡分析陣列技術(shù),如比較基因組雜交 

QIAGEN REPLI-g Mini Kit 全基因組擴(kuò)增試劑

QIAGEN REPLI-g Mini Kit產(chǎn)品訂購信息

 品牌                         產(chǎn)品貨號(hào)                 產(chǎn)品名稱               

QIAGEN                    150023              REPLI-g Mini Kit (25)         

QIAGEN                    150025              REPLI-g Mini Kit (100)

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