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什么都能用多聚甲醛通常嗎?vs91化學(xué)工業(yè)儀器網(wǎng)

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放大字體  縮小字體    發(fā)布日期:2021-01-26  來源:儀器網(wǎng)  作者:Mr liao  瀏覽次數(shù):66
核心提示: 前言:我們實(shí)驗(yàn)中,標(biāo)本中大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì),以及蛋白質(zhì)為水溶性,在用于研究之前,常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng),使蛋白質(zhì)凝固,因此在醫(yī)藥上可做檢驗(yàn)時(shí)的組織固定劑、以及防腐劑等。而在固定劑中,

 前言:我們實(shí)驗(yàn)中,標(biāo)本中大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì),以及蛋白質(zhì)為水溶性,在用于研究之前,常需固定,即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng),使蛋白質(zhì)凝固,因此在醫(yī)藥上可做檢驗(yàn)時(shí)的組織固定劑、以及防腐劑等。而在固定劑中,zui常用的是多聚甲醛。


多聚甲醛染色前固定:
   做實(shí)驗(yàn)的過程中,因?yàn)榕挪簧蠈?shí)驗(yàn)儀器、希望標(biāo)本能夠較長(zhǎng)時(shí)間存放等等原因,很多實(shí)驗(yàn)人員習(xí)慣性都會(huì)用4%多聚甲醛預(yù)先固定標(biāo)本。也有為了滅活標(biāo)本里面可能存在的微生物(細(xì)菌、病毒等),起到安全保障作用;或者是做胞內(nèi)染色前的準(zhǔn)備,進(jìn)行固定細(xì)胞。


  然而,可能很多人忽視了一點(diǎn),就是如果在染色之前用多聚甲醛固定標(biāo)本,細(xì)胞表面有些位點(diǎn)在固定后構(gòu)象發(fā)生改變,使得抗體無法結(jié)合產(chǎn)生假陰性,也可能由于固定作用,導(dǎo)致其它位點(diǎn)產(chǎn)生非特異性結(jié)合(假陽(yáng)性)。


   因此,知道哪些抗體染色前不能預(yù)固定,十分重要。

 

多聚甲醛染色后固定:
   染色后的固定,就與抗原構(gòu)象關(guān)系不大了,更多的是熒光素。以前4色以內(nèi)的時(shí)候,用的熒光素都是非串聯(lián)的,因此大多數(shù)影響不大,但隨著各種新型串聯(lián)染料的出現(xiàn),多聚甲醛固定就成了問題了。


   事實(shí)上,當(dāng)您去搜索串聯(lián)染色標(biāo)記(如PE-cy7、APC-cy7等)的抗體時(shí),會(huì)發(fā)現(xiàn)一些比較詳細(xì)的描述里面會(huì)注明,用多聚甲醛固定過的樣本,必須在4小時(shí)內(nèi)檢測(cè),否則容易導(dǎo)致串聯(lián)染料降解,若要長(zhǎng)時(shí)間保存,還是需要洗滌后,轉(zhuǎn)移到不含多聚甲醛的緩沖液中。


   需要注意的是,做GFP熒光檢測(cè)的同學(xué),也需要注意一下,多聚甲醛固定也會(huì)影響GFP,多聚甲醛固定后,并非使GFP熒光淬滅,而是使GFP蛋白構(gòu)象發(fā)生改變,無法產(chǎn)生熒光。有時(shí)候您固定后檢測(cè)到的熒光可能是自發(fā)熒光,或剩余的未被改變構(gòu)象的GFP發(fā)出的。


解決方案:
1、 如果檢測(cè)的是前述表格中容易被多聚甲醛影響的分子,請(qǐng)盡量不要預(yù)固定,如需長(zhǎng)期保存樣本,可以考慮凍存單個(gè)核細(xì)胞。
2、 如果檢測(cè)的是前述表格中不會(huì)受多聚甲醛影響的分子,可用1%多聚甲醛固定保存,但FSC、SSC和熒光強(qiáng)度影響較大。
3、 如果希望在染色后保持較長(zhǎng)時(shí)間熒光穩(wěn)定,仍建議:避光4度,如果仍不放心,可考慮購(gòu)買商品化的適用于串聯(lián)染料的專用固定劑。

                          (來源:上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司)

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