圖1 多光子顯微鏡基本套件 ???? ?? 本系統(tǒng)的光路圖如圖2所示
圖2 多光子顯微鏡套件光路圖 ??? 多光子顯微鏡系統(tǒng)在生物學(xué)領(lǐng)域的一個成功實例是活體細(xì)胞成像。多光子顯微技術(shù)非常適合于樣品需要長時間成像的活體細(xì)胞研究。其高速掃描特性減少了在活體細(xì)胞成像過程中的光漂白效應(yīng),這對于細(xì)胞成像是很有利的。Thorlabs公司的多光子系統(tǒng)通過一個掃描振鏡對實現(xiàn)高速掃描。該系統(tǒng)還采用近紅外雙光子激發(fā)效應(yīng),促進(jìn)了樣品的深度滲透,將光漂白效應(yīng)Z小化,與單光子激發(fā)技術(shù)相比降低了光學(xué)毒性。多光子顯微技術(shù)已經(jīng)成功用于追蹤GFP標(biāo)記的細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu),如C.Elegens線蟲中的G蛋白受體,見圖3。
圖3 C.Elegens線蟲中的G蛋白受體成像
??? 實時活體腎血流動的灌注檢測也是一個例子,兩個通道使用一個Olympus 20X 1.0 NA物鏡以30幀/秒(512*512分辨率)同時進(jìn)行圖像采集。血液與葡萄糖(血漿,綠色)和1微米熒光微球的混合物一起灌注。在血管中我們追蹤兩個獨立的微球(A和B)。后續(xù)幀之間的高瞬時分辨率保證了各微球更極ng確的速度測量。在綠色的血漿之中我們還可以觀察到一些暗色物體,這些暗色物體是紅細(xì)胞,這樣就為血液流動分析提供了額外的依據(jù)。
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