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![]() 慢病毒包裝原理 慢病毒表達質(zhì)粒包含了包裝、感染、穩(wěn)定整合宿主細胞基因組所需的遺傳信息,包裝輔助質(zhì)粒則提供了所有的轉(zhuǎn)錄、包裝和重組假病毒所需要的輔助蛋白。為產(chǎn)出高滴度的病毒顆粒,通常將表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染至包裝細胞中進行病毒的包裝。包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外培養(yǎng)液中。通過收集含病毒顆粒的上清,進行濃縮和純化可獲得高純度和高滴度的慢病毒。 慢病毒包裝步驟 1、轉(zhuǎn)染前1天,將293T細胞接種于10 CM培養(yǎng)皿中,加入15 mL含10%FBS的DMEM培養(yǎng)液,置37℃,5%CO2培養(yǎng)至約70-80%融合時,進行細胞轉(zhuǎn)染。 2、轉(zhuǎn)染293T細胞 (1)將慢病毒表達質(zhì)粒和包裝質(zhì)粒加入到Opti-MEM中,混勻。 (2)將適量的Lipofectamine 2000 (invitrogen)加入到Opti-MEM中,混勻。 (3)5分鐘后,將... [詳細介紹] |